在分子生物學(xué)研究中，獲取質(zhì)量較高的核酸樣品是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵前提。由于真菌細(xì)胞壁堅(jiān)韌且成分復(fù)雜，真菌核酸的提取過(guò)程比細(xì)菌或者植物細(xì)胞更加棘手，需要格外把握好一些關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本文，核酸提取試劑廠家慧慶小編就為大家具體介紹一下真菌核酸提取需要注意什么。
  

  真菌核酸提取需要注意什么？

  

  1.合理控制破壁程度

  
  真菌細(xì)胞壁主要由幾丁質(zhì)、甘露聚糖等物質(zhì)交錯(cuò)組成，結(jié)構(gòu)十分堅(jiān)硬。單純使用常規(guī)的化學(xué)裂解方法很難完全打開(kāi)細(xì)胞壁。因此，在提取前需要先行機(jī)械研磨或酶解等物理化學(xué)手段，充分破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，釋放出核酸分子。破壁不完整會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)量低下，但也要避免過(guò)度破壞而造成核酸降解。
  

  2.蛋白酶酶解去除蛋白質(zhì)污染

  
  真菌細(xì)胞內(nèi)富含大量蛋白質(zhì)，如果不去除這些蛋白質(zhì)，將會(huì)影響后續(xù)純化和檢測(cè)。常規(guī)做法是在提取過(guò)程中適量添加蛋白酶進(jìn)行酶解處理。蛋白酶的用量、活性和酶解時(shí)間都需要合理控制，避免因用量過(guò)多或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而降解核酸分子本身。同時(shí)也要注意蛋白酶的純度，避免受到核酸酶的污染降解。

  3.防止來(lái)自外源性核酸酶的降解

  
  真菌樣品易受到細(xì)菌等微生物污染，而這些污染物往往攜帶有核酸酶，會(huì)降解目標(biāo)核酸。因此，在整個(gè)提取過(guò)程中都須格外注意無(wú)菌操作，預(yù)防核酸酶污染。實(shí)驗(yàn)器材需嚴(yán)格消毒，試劑溶液須新鮮配制使用。一旦發(fā)現(xiàn)污染，要立即采取措施進(jìn)行滅活處理，防患于未然。
  

  4.注意保護(hù)RNA完整性

  
  如需提取RNA,操作要點(diǎn)更加嚴(yán)格。RNA比DNA更易降解，對(duì)溫度、pH值等環(huán)境條件更加敏感。所有試劑溶液需無(wú)RNase污染，實(shí)驗(yàn)操作盡量在冰浴條件下進(jìn)行以延緩RNA水解。加入適量RNA酶抑制劑也是一種有效防控措施。提取后需立即進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄或低溫保存，以確保RNA樣品完整無(wú)損。
  

  5.純化去除雜質(zhì)

  
  經(jīng)過(guò)上述步驟得到的核酸溶液往往還殘留有大量雜質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多糖等。這些雜質(zhì)會(huì)嚴(yán)重影響后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。因此，須通過(guò)純化步驟如離心、層析柱等方式去除這些污染物，獲得純度更高的核酸制品。純化手段的選擇要因核酸種類(lèi)而定，操作規(guī)程也需嚴(yán)格把控。
  
  真菌核酸提取需要注意什么？希望上文對(duì)您有所啟發(fā)?？傊?，真菌核酸提取雖然操作較為繁瑣，但只要充分重視上述注意事項(xiàng)，嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)流程有序執(zhí)行，就能從這些堅(jiān)韌的真菌樣品中獲得理想的核酸材料，為后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。