RNA是細胞中的關(guān)鍵分子，參與多種生物學(xué)過程，包括編碼、解碼、調(diào)控和表達基因。為了研究這些過程，我們需要利用核酸提取試劑從動物組織中提取RNA。本文慧慶小編將詳細介紹動物組織總RNA提取的原理和步驟。
  

  一、動物組織總RNA提取的原理

  
  1.分子結(jié)構(gòu)與特性：RNA由核糖、磷酸和四種堿基組成：腺嘌呤、鳥嘌呤、尿嘧啶和胞嘧啶。其穩(wěn)定性相對低，容易受到核酸酶的降解。因此，在RNA提取過程中，防止RNA的降解是很重要的。
  
  2.細胞破裂：為了從組織中釋放RNA，先需要破裂細胞。這通常通過物理和化學(xué)方法結(jié)合進行，如機械破碎和使用高濃度鹽溶液。
  
  3.RNA的提取與純化：RNA的提取基于其與其他細胞成分的不同親和性。在高濃度鹽的存在下，RNA在有機溶劑如酚中是可溶的，而DNA和蛋白質(zhì)則是不溶的。此外，利用酒精沉淀法可以進一步純化RNA。
  
  4.RNA的穩(wěn)定性：提取出的RNA需要在低溫和避光的條件下保存，并添加抑制核酸酶活性的試劑，以確保其穩(wěn)定性。

  二、動物組織總RNA提取的步驟

  

  1.樣本的準(zhǔn)備與處理

  
  選擇健康、無污染的組織樣本，避免外部污染因素影響RNA質(zhì)量。組織樣本需在盡快時間內(nèi)進行處理或存儲以減少RNA的降解。一般使用液氮立即冷凍組織，然后在-80°C的條件下長期保存。在實際操作中，還需要避免多次凍融，因為這可能會導(dǎo)致RNA的降解。
  

  2.細胞破裂

  
  為了從組織中釋放RNA，細胞膜和細胞核膜需要被破碎。組織樣本放入均質(zhì)器中，并添加適量的核酸提取緩沖液。該緩沖液通常含有某些高濃度的鹽，可以幫助穩(wěn)定細胞中的蛋白質(zhì)，防止它們對RNA的降解。通過機械破碎的方法，如研磨或超聲，確保細胞均勻破裂，釋放內(nèi)含的RNA。
  

  3.RNA的提取

  
  RNA的提取是基于其與其他細胞成分的相對親和性。先將均質(zhì)液轉(zhuǎn)移到離心管中，加入等體積的酚-氯仿。酚有助于蛋白質(zhì)的沉淀，而RNA則保持在水相中。充分混勻后，離心分離兩個相。水相（上層）含有RNA，而有機相（下層）和界面含有蛋白質(zhì)和DNA。為了確保RNA的純度，需要重復(fù)此步驟至少一次。
  

  4.RNA的純化

  
  RNA的純化步驟旨在進一步除去可能的污染物。將上述提取步驟中得到的水相轉(zhuǎn)移到新的離心管中，加入等體積的異丙醇或冷凍乙醇，使RNA沉淀。充分混勻后，置于低溫冷凍（例如，-20°C或-80°C）一段時間，通常為1小時或過夜。隨后，進行離心以收集RNA沉淀。沉淀物需要用75%的乙醇洗滌1-2次以除去殘余的鹽和其他雜質(zhì)。完成洗滌后，乙醇需完成揮發(fā)，然后使用無酶抑制劑的DEPC水或RNase-free的緩沖液重懸RNA。
  
  動物組織總rna提取完成后，需要將提取后的RNA進行定量和質(zhì)控：紫外光譜光度計是常用的定量工具，其中260nm和280nm的吸收比值可以反映RNA的純度；對于質(zhì)控，常用1%瓊脂糖凝膠電泳進行，通過電泳帶的形態(tài)可以判斷RNA的完整性。此外，還可以使用專業(yè)的生物分析儀器進行更為準(zhǔn)確的質(zhì)量評估。